Гемоглобины электрофорезын туршилт

Туршилтын зарчим

Гемоглобины электрофорез нь янз бүрийн хэвийн болон хэвийн бус гемоглобиныг илрүүлэх, баталгаажуулах зорилготой.

Гемоглобины янз бүрийн төрлийн цэнэг, изоэлектрик цэгүүд өөр өөр байдаг тул тодорхой рН буфер уусмалд гемоглобины изоэлектрик цэг нь буфер уусмалын рН-ээс бага байх үед гемоглобины сөрөг цэнэг авч, электрофорезын үед анод руу шилждэг. Үүний эсрэгээр эерэг цэнэгтэй гемоглобин катод руу шилждэг.

Тодорхой хүчдэлийн дор, электрофорезийн тодорхой хугацааны дараа өөр өөр цэнэг, молекул жинтэй гемоглобинууд өөр өөр шилжилтийн чиглэл, хурдыг харуулдаг. Энэ нь ялгаатай бүсүүдийг салгах боломжийг олгодог бөгөөд дараа нь янз бүрийн гемоглобины хэмжээг тодорхойлохын тулд эдгээр бүсэд колориметрийн эсвэл электрофоретик сканнерийн шинжилгээг хийж болно. Хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг арга бол рН 8.6 целлюлоз ацетат мембран электрофорез юм.

Цитоплазм дотор гликоген эсвэл полисахарид (мукополисахарид, мукопротейн, гликопротейн, гликолипид гэх мэт) агуулагдах этилен гликолын бүлгүүд (CHOH-CHOH) үечилсэн хүчлээр исэлдэж, альдегидийн бүлэг (CHO-CHO) болж хувирдаг. Эдгээр альдегидийн бүлгүүд нь өнгөгүй нил ягаан-улаан Шифф урвалжтай нийлж, эсийн доторх полисахарид агуулагдах газруудад нил ягаан өнгийн будаг үүсгэдэг. Энэ урвалыг үечилсэн хүчил-Шифф (PAS) будалт гэж нэрлэдэг бөгөөд өмнө нь гликоген будалт гэж нэрлэдэг.

Туршилтын арга

Материал:Целлюлозын ацетатгишүүнbrane, электрофорезийн аппарат(DYCP-38C ба цахилгаан хангамж DYY-6C), Дээд зэргийн дээж ачаалах хэрэгсэл(пипетк), спектрофотометр, колориметрийн кювет, буфер.

Буфер:

(1) рН 8.6 TEB буфер: 10.29 г Tris, 0.6 г EDTA, 3.2 г борын хүчлийг жинлэн авч 1000 мл нэрмэл ус нэмнэ.

(2) Боратын буфер: 6.87 г борын хүчил, 5.56 г борын хүчил жинлээд 1000 мл хүртэл нэрмэл ус нэмнэ.

Процедур:

PГемоглобины уусмалыг нөхөн сэргээх

Гепарин эсвэл натрийн цитрат агуулсан 3 мл цусыг антикоагулянт болгон авна. 2000 эрг/мин-д 10 минутын турш центрифуг хийж, плазмыг устгана. Цусны улаан эсийг физиологийн давсны уусмалаар гурван удаа угаана (750 эрг / мин, центрифуг бүрд 5 минут). 2200 эрг/мин-д 10 минутын турш центрифуг хийж, дээд давхаргыг устгана. Тэнцүү хэмжээний нэрмэл ус нэмээд дараа нь нүүрстөрөгчийн дөрвөн хлоридын эзэлхүүнийг 0.5 дахин нэмнэ. 5 минутын турш хүчтэй сэгсэрч, дараа нь Hb-ийн дээд уусмалыг цуглуулахын тулд 2200 rpm-д 10 минутын турш центрифуг хийнэ.

Мембраныг нэвт норгох

Целлюлозын ацетат мембраныг 3 см × 8 см хэмжээтэй тууз болгон хайчилж ав. Тэдгээрийг рН 8.6 TEB буферт бүрэн ханатал дэвтээж, шүүлтүүрийн цаасаар арчиж хатаана.

Толбо

Пипеткээр 10 мкл гемоглобины уусмалыг ирмэгээс 1.5 см зайд целлюлозын ацетат мембран (барзгар тал) дээр босоо байдлаар тогтооно.

Электрофорез

Боратын буферийн уусмалыг электрофорезын камерт хийнэ. Целлюлозын ацетат мембраныг тасалгааны катодын төгсгөлд толботой талтай байрлуулна. 200 В-д 30 минутын турш ажиллуулна.

Элюци

HbA болон HbA2 бүсийг хайчилж, тус тусад нь туршилтын хоолойд хийж, 15 мл, 3 мл нэрмэл ус нэмнэ. Гемоглобиныг бүрэн шингэлэхийн тулд зөөлөн сэгсэрч, дараа нь холино.

Колориметр

Уусмалыг нэрмэл усаар шингээж, шингээлтийг 415 нм-д хэмжинэ.

Тооцоолол

HbA2(%) = HbA2 хоолойн шингээлт / (HbA хоолойн шингээлт × 5 + HbA2 хоолойн шингээлт) × 100%

Туршилтын үр дүнгийн тооцоо

рН 8.6 TEB буфер целлюлозын ацетат электрофорезийн лавлагааны хүрээ: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

Тэмдэглэл

Электрофорез хийх хугацаа хэт урт байх ёсгүй. Электрофорезын үед целлюлозын ацетат мембран хатаж болохгүй. HbA ба HbA2 тодорхой тусгаарлагдсан үед электрофорезыг зогсооно. Удаан үргэлжилсэн электрофорез нь туузан дамжих ба бүдэгрэх шалтгаан болдог.

Хэт их дээж хэрэглэхээс зайлсхий. Хэт их гемоглобины шингэн нь туузыг салгах эсвэл хангалтгүй будалтанд хүргэж, HbA-ийн түвшин хуурамчаар нэмэгддэг.

Целлюлозын ацетат мембраныг уургаар бохирдуулахаас сэргийлнэ.

Гүйдэл нь хэт өндөр байх ёсгүй; эс бөгөөс гемоглобины хамтлагууд салахгүй байж болно.

Хяналтын хэрэгсэл болгон хэвийн хүмүүсийн сорьц болон шаардлагатай мэдэгдэж буй хэвийн бус гемоглобины сорьцыг үргэлж оруулаарай.

Бээжингийн Лиуи биотехнологи нь загвар болох гемоглобины электрофорезийн мэргэжлийн электрофорезийн сав үйлдвэрлэдэг.DYCP-38Cцеллюлоз ацетат мембран электрофорезийн сав, целлюлоз ацетат мембран электрофорезийн савны хувьд электрофорезын тэжээлийн хоёр загвар байдаг.ӨНӨ-2СболонӨНӨ-6Сцахилгаан хангамж.

Үүний зэрэгцээ, Бээжингийн Лиуи биотехнологи нь үйлчлүүлэгчдэд целлюлоз ацетат мембранаар хангадаг бөгөөд целлюлоз ацетат мембраны хэмжээг өөрчлөх боломжтой. Биднээс дээж болон нэмэлт мэдээлэл авахыг хүсвэл тавтай морилно уу.

Beijing Liuyi брэнд нь Хятадад 50 гаруй жилийн түүхтэй бөгөөд тус компани нь дэлхийн өнцөг булан бүрт тогтвортой, өндөр чанартай бүтээгдэхүүн нийлүүлэх боломжтой. Олон жилийн хөгжлийн явцад энэ нь таны сонголтод зохистой юм!

Бид одоо түнш хайж байна, OEM электрофорезийн сав, дистрибьютер хоёулаа урьж байна.

Хэрэв танд манай бүтээгдэхүүнийг худалдан авах төлөвлөгөө байгаа бол бидэнтэй холбоо барина уу. Та бидэнд имэйлээр мессеж илгээх боломжтой[имэйлээр хамгаалагдсан]эсвэл[имэйлээр хамгаалагдсан], эсвэл бидэн рүү залгана уу +86 15810650221 эсвэл Whatsapp +86 15810650221, Wechat: 15810650221 нэмнэ үү.