Полиакриламид гель электрофорез гэж юу вэ?

Полиакриламид гель электрофорез

Гель электрофорез нь ДНХ, РНХ, уураг зэрэг макромолекулуудыг салгах боломжийг олгодог биологийн салбарын лабораторийн үндсэн арга юм. Янз бүрийн тусгаарлах орчин ба механизмууд нь эдгээр молекулуудын дэд бүлгүүдийг физик шинж чанарыг нь ашиглан илүү үр дүнтэйгээр салгах боломжийг олгодог. Ялангуяа уургийн хувьд полиакриламидын гель электрофорез (PAGE) нь ихэвчлэн сонгодог арга юм.

PAGE нь уураг зэрэг макромолекулуудыг электрофорезийн хөдөлгөөн, өөрөөр хэлбэл аналитуудын эсрэг цэнэгийн электрод руу шилжих чадварт үндэслэн ялгах арга юм. PAGE-д энэ нь молекулын цэнэг, хэмжээ (молекулын жин) болон хэлбэрээр тодорхойлогддог. Шинжилгээний бодисууд нь полиакриламидын гель дотор үүссэн нүх сүвээр дамждаг. ДНХ, РНХ-ээс ялгаатай нь уураг нь агуулагдах амин хүчлээс хамаарч өөр өөр байдаг бөгөөд энэ нь тэдний ажиллах явцад нөлөөлдөг. Амин хүчлийн утаснууд нь хоёрдогч бүтцийг бий болгож, тэдгээрийн илэрхий хэмжээ, улмаар нүх сүвээр хэрхэн шилжихэд нөлөөлдөг. Тиймээс хэмжээг нь илүү нарийвчлалтай тооцоолох шаардлагатай бол заримдаа уурагуудыг электрофорез хийхээс өмнө денатураци хийх нь зүйтэй.

SDS ХУУДАС

Натри-додецил сульфат полиакриламидын гель электрофорез нь 5-250 кДа масстай уургийн молекулуудыг ялгахад ашигладаг арга юм. Уургууд нь зөвхөн молекулын жингийн үндсэн дээр хуваагддаг. Уургийн дээжийн дотоод цэнэгийг нуун дарагдуулдаг гель бэлтгэхэд анион гадаргуугийн идэвхт бодис болох натрийн додецил сульфатыг нэмж, массын харьцаатай ижил цэнэг өгдөг. Энгийнээр хэлбэл, уурагуудыг денатурат болгож, сөрөг цэнэг өгдөг.

Төрөлх PAGE

Native PAGE нь уураг ялгахад денатуратгүй гель ашигладаг арга юм. SDS PAGE-ээс ялгаатай нь гель бэлтгэхэд денатурат бодис нэмдэггүй. Үүний үр дүнд уургийн ялгарал нь уургийн цэнэг, хэмжээ зэргээс хамаарч явагддаг. Энэ техникт уургийн бүтэц, нугалах, амин хүчлийн гинж нь салалтаас хамаардаг хүчин зүйлүүд юм. Уургууд нь энэ процесст гэмтдэггүй бөгөөд салгаж дууссаны дараа нөхөн сэргээх боломжтой.

Полиакриламид гель электрофорез (PAGE) хэрхэн ажилладаг вэ?

PAGE-ийн үндсэн зарчим нь цахилгаан гүйдэл ашиглан полиакриламидын гельний нүх сүвээр дамжин задлан шинжлэгдэх бодисуудыг ялгах явдал юм. Үүнд хүрэхийн тулд аммонийн персульфат (APS) нэмснээр акриламид-бисакриламидын хольцыг полимержуулна (полиакриламид). Тетраметилэтилендиамин (TEMED)-ээр катализлагдсан урвал нь аналитууд хөдөлж болох нүх сүв бүхий тор хэлбэртэй бүтэц үүсгэдэг (Зураг 2). Гельд агуулагдах нийт акриламидын хувь өндөр байх тусам нүх сүвний хэмжээ бага байх тусам уураг дамжин өнгөрөх чадвар бага байх болно. Акриламид ба бисакриламидын харьцаа нь нүх сүвний хэмжээд нөлөөлдөг боловч энэ нь ихэвчлэн тогтмол байдаг. Нүх сүвний хэмжээ бага байх нь жижиг уургийн гель дундуур шилжих хурдыг бууруулж, тэдгээрийн нягтралыг сайжруулж, гүйдэл хэрэглэх үед буфер руу хурдан орохоос сэргийлдэг.

Полиакриламидын гель электрофорез хийх төхөөрөмж

Гель электрофорезийн эс (танк/тасалгаа)
Полиакриламидын гель электрофорез (PAGE) нь агароз гель савнаас ялгаатай. Агароз гель сав нь хэвтээ, PAGE сав нь босоо байна. Босоо электрофорезын үүрээр (танк/тасалгаа) нимгэн гель (ихэвчлэн 1.0мм эсвэл 1.5мм) хоёр шилэн хавтангийн хооронд цутгаж, гельний ёроолыг нэг камерт буферт, дээд хэсгийг буферт живүүлэхээр угсарна. өөр танхимд. Гүйдэл хэрэглэх үед бага хэмжээний буфер гельээр дамжин дээд камераас доод камер руу шилждэг. Угсралтыг босоо байрлалд байлгахын тулд хүчирхэг хавчаараар тоног төхөөрөмж нь жигд хөргөлттэй гель хурдан гүйх боломжийг олгодог бөгөөд ингэснээр тодорхой туузууд үүсдэг.

Бээжингийн Лиуи биотехнологийн ХХК (Liuyi Biotechnology) нь янз бүрийн хэмжээтэй полиакриламидын гель электрофорезийн эсүүд (танк / камер) үйлдвэрлэдэг. DYCZ-20C ба DYCZ-20G загварууд нь ДНХ-ийн дарааллын шинжилгээнд зориулагдсан босоо электрофорезийн эсүүд (танк/тасалгаа) юм. Зарим босоо электрофорезийн эсүүд (танк/танхимууд) нь DYCZ-24DN, DYCZ-25D, DYCZ-25E загварууд шиг Blotting системтэй нийцдэг, DYCZ-40D, DYCZ-40G, DYCZ-40F загварууд, Эдгээр нь уургийн молекулыг гельээс мембран руу шилжүүлэхэд ашиглагддаг. SDS-PAGE электрофорезийн дараа Western Blotting нь уургийн хольц дахь тодорхой уураг илрүүлэх арга юм. Та туршилтын шаардлагын дагуу эдгээр цэвэрлэх системийг сонгож болно.

Электрофорезын цахилгаан хангамж
Гель ажиллуулах цахилгааныг хангахын тулд танд электрофорезийн тэжээлийн хангамж хэрэгтэй болно. Liuyi Biotechnology-д бид бүх төрлийн хэрэглээнд зориулагдсан электрофорезийн тэжээлийн хангамжийг хангадаг. Өндөр тогтвортой хүчдэл, гүйдэл бүхий DYY-12 ба DYY-12C загварууд нь өндөр хүчдэлийн электрофорезийн шаардлагыг хангаж чадна. Энэ нь зогсолт, цаг хугацаа, VH, алхам алхмаар хэрэглээний функцтэй. Эдгээр нь IEF болон ДНХ-ийн дарааллын электрофорезийн хэрэглээнд тохиромжтой. Уураг ба ДНХ-ийн электрофорезийн ерөнхий хэрэглээний хувьд бид DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 гэх мэт загваруудыг ашигладаг бөгөөд эдгээр нь электрофорезийн эсүүд (танк / танхим) бүхий халуун борлуулалтын цахилгаан хангамж юм. Эдгээрийг сургуулийн лаборатори, эмнэлгийн лаборатори гэх мэт дунд болон бага хүчдэлийн электрофорезын хэрэглээнд ашиглаж болно. Цахилгаан хангамжийн бусад загваруудыг манай вэбсайтаас авна уу.

Liuyi брэнд нь Хятадад 50 гаруй жилийн түүхтэй бөгөөд компани нь дэлхийн өнцөг булан бүрт тогтвортой, өндөр чанартай бүтээгдэхүүн нийлүүлэх боломжтой. Олон жилийн хөгжлийн явцад энэ нь таны сонголтод зохистой юм!

Бидний тухай дэлгэрэнгүй мэдээлэл авахыг хүсвэл бидэнтэй имэйлээр холбогдоно уу[имэйлээр хамгаалагдсан] or [имэйлээр хамгаалагдсан].

Полиакриламид гель электрофорез гэж юу вэ?
1. Карен Стюард Полиакриламидын гель электрофорез, энэ нь хэрхэн ажилладаг, техникийн хувилбарууд, түүний хэрэглээ